上述任一所述复合扩增体系还可包括进行pcr扩增反应所需的试剂。所述“进行pcr扩增反应所需的试剂”不包括pcr扩增反应所需的引物,重庆专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富。上述任一所述复合扩增体系可为20μl,由10μl2×mastermix、上述任一所述引物组合和模板组成。2×mastermix具体可为德国qiagen公司的产品。所述模板具体可为浓度为1ng/μl的标准品2800m的水溶液或样品的基因组dna。所述样品可为人口腔拭子。所述标准品2800m具体可为promega公司的产品,产品目录号为dd7251,重庆专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富,重庆专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富。含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围;所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种:(h1)str分型;(h2)y-str分型;(h3)个体识别;(h4)亲权鉴定;(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述复合扩增体系或上述任一所述试剂盒的制备方法;该制备方法包括将上述任一所述引物组合中的各条引物单独包装的步骤。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系在制备试剂盒中的应用;所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种:。迈杰转化医学获得了欧盟ISO 13485质量认证并通过了国家医疗器械GMP稽查。重庆专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富
连接测序法连接测序法与其他两种方法不同,因为他不用DNA聚合酶来结合核苷酸,而是用16种8-merOligo核苷酸探针,在相互连接的5端,每个探针都吸附了四种荧光染料其中的一种。每8-mer包含两个探针特异碱基,和6个退化碱基。测序反应开始时,引物先结合到适配序列上,再和相应探针结合。这个探针的结合时在退火条件下由两个探针特异碱基引导,再由DNA连接酶连接到引物序列上。未结合的oligo核苷酸被洗去后,荧光信号就开始检测会记录。在这之后,切割掉荧光信号和8-mer探针的***3个碱基,就可以开始下一个循环了。在大约7个循环的连接之后,DNA会变性,而另一个测序引物,在前一个引物的下一个碱基后开始重复这些步骤,总共用5个测序引物。这项技术的主要缺点就是产生的测序片段特别短。离子半导体测序离子半导体测序法时在测序反应种通过释放氢离子来检测一个基因蔟的序列。每个基因蔟直接定位在一个半导体三极管上,这个半导体三极管可以检测溶液的ph值。在核苷酸结合过程中,一个氢离子被释放到溶液中并会被半导体三极管检测到。这个测序反应的进行过程和焦磷酸法类似,但是花费只是他的几分之一。 吉林全平台迈杰转化医学NGS平台技术指导迈杰转化医学拥有3D HISTECH Pannoramic MIDI数字化病理扫描仪及91360远程病理系统。
染色体STR不属于测序技术的,它是一类分子检测技术,例如Y染色体-STR,一般通过PCR、电泳凝胶结合来分析这段串联重复序列的存在或者多态性,常用来检测性别或亲子鉴定,而不能测出具体的DNA序列信息。测序技术是一代测序(sanger测序)、二代测序(高通量测序)、三代测序(单分子测序)为基础的。二代测序的缺点主要是由其PCR边复制边读取的原理决定的,测序时间长,读长短,末端质量差。三代测序中PacBio实际上就是针对这些缺点的升级,通过巧妙的微孔设计实现单分子读取,而且可以屏蔽游离dNTP的信号,不用每读取一次就要清洗—添加一次dNTP,所以读长比较长,测序速度快。就是样本—提DNA—打成小片段,然后就开始PCR啊末端修复啊加A啊片段选择啊一系列,***得到片段大小为300-500bp的DNA,ok文库搞定。虽然这行真的干的烦死了,不过离开了真的很想念。
反应体系为20μl,由10μl2×mastermix(德国qiagen公司)、1μl标准品2800m水溶液、引物混合物和无核酶水组成。该反应体系中,各个引物的浓度见表1中第5列。反应程序:95℃5min;95℃30s,60℃2min,72℃2min,28个循环;72℃5min;4℃保存。3、纯化和定量(1)取pcr扩增产物,按照pcrpurificationkit的说明书步骤进行纯化,得到pcr纯化产物。(2)将pcr纯化产物按照qubittmdsdnahsassaykit说明书,采用,得到pcr纯化产物的浓度。4、文库制备取pcr纯化产物,按照truseqdnapcr-freehtlibraryprepkit的说明书操作步骤依次进行末端修复、末端修复产物纯化、连接a-tail、连接adapter和连接产物的纯化,然后按照kapalibraryquantificationkit的说明书步骤进行文库定量及文库标准化,完成文库制备。5、上样测试取步骤4制备的文库,使用miseqreagentkitv3-600cycles测序试剂于miseqfgx二代测序仪上进行测序。6、数据分析测序结束后仪器自动生成fastq文件,使用。运行,在notepad中录入68个基因座基因配置文件。基因座基因配置文件如下:①基因座名称,②y,③正向引物后12个碱基,④反向引物前12个碱基的反向互补序列,⑤该基因座**序列的两个重复单元,⑥一个重复单元的碱基数。 覆盖多个主流IHC自动染色平台,适用范围广。
上述任一所述复合扩增体系还可包括进行pcr扩增反应所需的试剂。所述“进行pcr扩增反应所需的试剂”不包括pcr扩增反应所需的引物。上述任一所述复合扩增体系可为20μl,由10μl2×mastermix、上述任一所述引物组合和模板组成。2×mastermix具体可为德国qiagen公司的产品。所述模板具体可为浓度为1ng/μl的标准品2800m的水溶液或样品的基因组dna。所述样品可为人口腔拭子。所述标准品2800m具体可为promega公司的产品,产品目录号为dd7251。含有上述任一所述引物组合的试剂盒也属于本发明的保护范围;所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种:(h1)str分型;(h2)y-str分型;(h3)个体识别;(h4)亲权鉴定;(h5)种族推断。本发明还保护上述任一所述复合扩增体系或上述任一所述试剂盒的制备方法;该制备方法包括将上述任一所述引物组合中的各条引物单独包装的步骤。本发明还保护上述任一所述引物组合或上述任一所述复合扩增体系在制备试剂盒中的应用;所述试剂盒的用途可为(h1)-(h5)中的至少一种:。 迈杰转化医学为客户提供生物标记物发现、 靶点验证、伴随诊断开发与商业化、患者用药指导等一体化解决方案。江苏标准迈杰转化医学NGS平台技术指导
使用北欧免疫组化质控中心NordiQC推荐的IHC抗体组合。重庆专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富
本发明属于法医学技术领域,具体涉及基于二代测序技术检测68个基因座的试剂盒及其使用的引物组合,尤其涉及基于二代测序技术检测67个y-str基因座和amelogenin基因座的试剂盒及其使用的引物组合。背景技术:短串联重复(shorttandemrepeat,str)是由2~6bp重复单位串联组成且***存在于人类基因组中的一类具有长度多态性的dna序列,是目前法医个体识别和亲子鉴定应用*****的遗传标记。人类y染色体短串联重复(y-chromosomeshorttandemrepeats,y-str)具有父系遗传、缺乏重组、分型简单、信息量大、多态性高等特点,是研究人类的起源进化、民族差异、种族差异、群体及地区分布等的有力工具。因此,y染色体str基因座多态性研究可为法医学个体识别和亲权鉴定提供重要手段,在诸如父系家族的亲权鉴定、混合斑男性成分的检测、不同男性个体混合物的分析、追溯父系迁移历史及重构同一父系家族等方向都具有独特的应用价值。目前,荧光标记多重扩增结合毛细管电泳(fluorescentlabeledmultiplexpcr-capillaryelectrophoresis,pcr-ce)是str分型的主流技术;常用的商业化y-str分型试剂盒有y23(promega)、y(promega)、yfiler(thermofisherscientific)和yfilerplus。 重庆专业迈杰转化医学NGS平台经验丰富
公司拥有国际前列的产品开发团队及完善的产品研发流程,与全球药企展开伴随诊断产品的开发合作,目前,公司已有多个诊断产品上市,另有数个伴随诊断产品已进入临床试验或申报阶段。
迈杰转化医学注重质量体系的建立,拥有StarLIMS实验室信息化管理系统,中心实验室获得了中国CNAS ISO 17025 国际实验室认可、美国CAP认证。在产品研发及商业化上,公司拥有GSP证书、获得了欧盟ISO 13485质量认证并通过了国家医疗器械GMP稽查。公司同时与国内外药企、诊断公司及检测平台公司等发起成立了中国医疗与伴随诊断专业委员会(中国生物工程学会下属),旨在推动中国医疗及伴随诊断事业健康发展。迈杰转化医学已然成为中国医疗中诊断整体解决方案的开拓者。
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